注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人肌生成抑制素Elisa Kit多少錢Anti-ZNF575 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 發(fā)育生物學 神經(jīng)生物學 干細胞

非凍型組織 RNA 保存液250mL哪里有賣Anti-ZNF592 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導

RNA 級 Oligo（dT） 纖維素25mg多少錢Anti-ZNF668 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 細胞骨架

口腔采樣拭子 50 支品牌Anti-ZNF608 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學

豬雌二醇受體（ER）elisa試劑盒Anti-ZNF638 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 細胞表面分子

小鼠β內(nèi)酰胺酶抑制劑（BLI）elisa試劑盒Anti-ZNF596 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 細胞周期蛋白 結(jié)合蛋白

小鼠opiorphin elisa試劑盒Anti-ZNF682 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白

小鼠17-酮類固醇（17-KS）elisa試劑盒Anti-ZNF691 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白

豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）elisa試劑盒Anti-ZNF682 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白

人鈣蛋白酶抑素抗體（ACAST-DⅣ）elisa試劑盒Anti-ZNF695 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白 細胞膜蛋白

人低密度脂蛋白（LDL）elisa試劑盒Anti-ZNF7 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 結(jié)合蛋白

人2　3Dir血栓烷B2（2,3-dir-TXB2）elisa試劑盒Anti-ZNF75 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 結(jié)合蛋白

魚熱休克蛋白HSP90α（HSP90AA1）elisa試劑盒Anti-ZNF875 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號

人源NK細胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-ZNF76 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號

小鼠角膜成纖維細胞價格Anti-ZNFN1A2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 神經(jīng)生物學 通道蛋白 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 新陳代謝 G蛋白信號

頭孢磺啶溶液（0.5mg）Anti-BrdU五味子乙

吐溫-80BSA (bovine serum albumin)  牛血清白蛋白（第五組分）五味子素

吐溫-80KLH (keyhole limpet hemocyanin)  血藍蛋白吳茱萸內(nèi)酯

羧芐青霉素溶液OVA (ovalbumin)  雞卵白蛋白吳茱萸新堿

無菌液體石蠟THY (thyroglobulin,TG)  甲狀腺球蛋白吳茱萸堿

無菌液體石蠟HSA/human Serum albumin  人血清白蛋白吳茱萸次堿

培養(yǎng)基Hu Fibrigen  人纖維蛋白原標準品

40%尿素溶液Streptavidin, SA  鏈霉親和素烏苯美司

溶液Protein G/FITC  FITC標記蛋白-G烏頭原堿

0.1%煌綠溶液Protein A  蛋白A維生素A
巨球菌PCR檢測試劑盒價格大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25塊/盒

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃100U

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量： 保存-20℃10毫克

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光25克

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。